lunes, 11 de mayo de 2009

Tijuana B.C a 31 de marzo del 2009.Materiales.Pipeta automatica.Pipeta volumetrica.Pipeta graduada.Pipeta Pasteur.Vaso de Precipitado.Probetagraduada.Gradilla de metal.5 Tubos de ensayo.Cristalizador.Pipeta Sali.Primero colocamos 1 ml, 2ml, 3ml , 4ml y 5 ml de agua en los tubos de ensayo segun correcponda a cada uno.Luego en la pipeta Pasteur colocamos 1 ml de agua y la medimos con la probeta graduada.En la lamina de inmunhologia de cristal colocamos una gota de agua con la ayuda de la pipeta Pasteur.
Camara de Neubauer
Recuento de eritrocitosRecuento de eritrocitos: ejemploObserve que en la grilla de la cámara de Neubauer las áreas de recuento de eritrocitos y linfocitos son diferentes. Los glóbulos rojos se cuentan en las áreas coloreadas de rojo, mientras que los glóbulos blancos se cuentan en las áreas coloreadas de azul. Ten en cuenta que la grilla central tiene 25 cuadrados de 1mm x 1mm de área y 0.10 mm de profundidad. El factor de dilución es por tanto de 1:200. Convierte el número de glóbulos rojos contados en 5 cuadrados a nº glóbulos rojos/µl. (1 µl (microlitro) = 1 mm3 )Como se hace? La imagen de abajo simula el campo que esta viendo al microscopio con un objetivo de 45x. Solo es visible el centro de la grilla. Intenta verificar esto al ir moviendo el campo de derecha-izquierda y de arriba-abajo, como si de una pletina de microscopio se tratase. Cuenta los glóbulos rojos en los cinco cuadrados mencionados anteriormente y determina el recuento de eritrocitos como se ha descrito anteriormente..Muy importante: Cuando un eritrocito se sitúa en mitad de las líneas superior y/o de la izquierda, entonces es contabilizado. Pero no se contabiliza cuando se sitúa en mitad de las líneas inferior y/o de la derecha..El rango normal de recuento de glóbulos rojos es el siguiente:Mujeres:3.9-5.6 millones/µlHombres:4.5-6.5 millones/µlDetermine el recuento del sujeto cuya muestra aparece en la imagen.Cual es la solución? Técnicas de estudio de líneas celularesTÉCNICAS DE CONTAJE CELULARUna suspensión celular se caracteriza por presentar un número de partículas microscópicas dispersas en un fluido. Habitualmente será necesario determinar tanto la densidad de las células en la suspensión como el porcentaje de éstas que son viables.Para determinar la densidad de las células se emplean diferentes técnicas, desde la relativamente simple cámara de contaje celular de la que existen numerosas variantes, entre ellas la que empleamos (cámara de Neubauer), hasta equipos automáticos de contaje celular como el "Cell Coulter" de la empresa Beckman-Coulter.El principio del contador celular se basa en la medida de los cambios en la resistencia eléctrica que se producen cuando una partícula no conductora en suspensión en un electrolito atraviesa un pequeño orificio. Como se puede ver en el esquema, una pequeña abertura entre los electrodos es la zona sensible a través de la que pasan las partículas que se encuentran en suspensión. Cuando una partícula atraviesa el orificio desplaza su propio volumen de electrolito. El volumen desplazado es medido como un pulso de voltaje. La altura de cada pulso es proporcional al volumen de la partícula. controlando la cantidad de la suspensión que circula a través del orificio es posible contar y medir el tamaño de las partículas. Es posible contar y medir varios miles de partículas por segundo, independientemente de su forma, color y densidad.En la unidad de Citometría de flujo y Microscopia Confocal de los Servicios Científico-Técnicos de la Universidad de Barcelona se dispone de contadores celulares.Sin embargo, es posible determinar la densidad celular empleando métodos más sencillos. Nos basta con una cámara de contaje celular, por ej. la cámara de Neubauer, y un microscopio. Una cámara de contaje celular es un dispositivo en el que se coloca una muestra de la suspensión a medir. El dispositivo presenta unas señales que determinan un volumen conocido (x microlitros). Al contar bajo el microscopio el número de partículas presentes en ese volumen se puede determinar la densidad de partículas en la suspensión de origen.La cámara de Neubauer es una cámara de contaje adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos con una depresión en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula como la que se ve en la imagen. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre dos lineas consecutivas de 0.25 mm. Así pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 milimetro cuadrado. La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1 milímetro, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 milímetro cúbico, es decir 0.1 microlitro.Si contamos las cuatro áreas sombreada (L) observando un total de x células entre las cuatro áreas, la concentración en la suspensión celular será :concentración en la suspensión (células / mL) = 10000 (x/4)En la imagen puedes observar el aspecto de una de las regiones marcadas como L y que en el microscopio se ven como una cuadrícula de 16 pequeños cuadrados de 0.25 milímetros de lado. Esta imagen ha sido tomada empleando un microscopio invertido de contraste de fases.Existen numerosos modelos de cámaras de contaje celular adaptadas a su uso en microscopía. En la imagen puedes observar una cámara de Neubauer doble, como las que usas en el laboratorio de prácticas.Para determinar la viabilidad celular se emplean diferentes métodos. El más común es el de tinción con azul tripán. El azul tripán es un coloide que se introduce en el interior de las células que presentan roturas en la membrana. Así pues las células que aparecen en la imagen, claramente de color azul, son consideradas no viables. Asimilar células blancas, por exclusión, a células viables es un error pues por este método se sobrevalora la viabilidad de las células en la suspensión, determinando como inviables sólo aquellas con la membrana rota. Existen otros métodos de determinación de la viabilidad celular como el más preciso de la tinción con ioduro de propidioEn la red dispones de descripciones detalladas sobre como utilizar un hemocitómetro, como la propuesta por P.J. Hansen, o la detallada descripción que aporta Beckton-Dickinson, y los problemas de cálculo de parámetros celulares que plantea empleando datos obtenidos a partir de un hemocitómetro, y otros protocolos para el contaje de células (en protocol-online)- arriba -Material docente diseñado y elaborado por Manuel Reina. Última actualización : . Comentarios : mreina@ub.eduse aseptiza el dedo con alcohol y luego se seca al aire o con algodón. Se coge entre el pulgar y el índice y se hace una punción rápida y penetrante a través de la piel de la punta del dedo con una lanceta estéril.2. Se deshecha la primera gota de sangre y se aspira la siguiente con la pipeta de dilución perfectamente limpia y seca hasta la señal 1 o 0.5 (también puede utilizarse la pipeta de hemoglobina, de 20 microlitros). Hay que evitar la entrada de burbujas de aire, pudiendo ayudarnos de un papel de filtro para conseguir el enrasado.3. A continuación se toma con la pipeta líquido de Hayem, isotónico con la sangre, hasta la señal 1; así, la sangre queda diluida al 1/10, si tomamos sangre hasta la señal 1, o al 1/20 si tomamos hasta 0.5. Esto es así porque el volumen de la bola de la pipeta es 100 veces superior al del capilar de la misma. (Si hemos utilizado la pipeta de hemoglobina podemos diluir su contenido en 2 o 4 ml de líquido de Hayem para obtener diluciones 1/100 o 1/200).4. Tomamos la pipeta (o el tubo de ensayo) entre los dedos índice y pulgar y agitamos. A través de la goma de conexión con la pipeta, soplamos para despreciar las primeras gotas por corresponder al líquido que estaba en el capilar.5. Se adapta un cubreobjetos sobre una cámara cuentaglóbulos limpia y seca y se coloca una gota en uno de los lados del cubre; esta gota penetra por capilaridad y rellena el retículo de la misma.6. Una vez preparada la cámara se coloca sobre la platina del microscopio dejándose unos minutos en reposo para que sedimenten los glóbulos. Disponemos el condensador bajo y luz débil; enfocamos primero con el objetivo débil seco y luego se cambia al fuerte seco para proceder al recuento, que se lleva a cabo en los cuadrados pequeños del retículo marcado en color rojo. Finalizado el recuento se procede a la limpieza de la pipeta con acético 1:3, agua destilada y alcohol-éter sucesivamente.7.El volumen de sangre en el cual se han contado las células resulta de multiplicar la profundidad de la cámara por el factor de dilución, la superficie de los cuadrados y el número de cuadrados contados.Con cámara de NEUBAUER: Superficie de 1 cuadrado grande (1/20 mm de lado):Volumen de un cuadrado grande (1/10 mm de profundidad):Si contamos "a" glóbulos rojos en "n" cuadrados pequeños, el número de glóbulos por cuadrado será a/n.Si en un volumen 1/4000 mm3 hay a/n glóbulos rojos, en 1 mm3 habrá X. Luego: siendo X el número de glóbulos rojos existentes por cada mm3 de sangre diluida.Si la sangre se diluyó a 1/100 o 1/200, habrá que multiplicar el valor X por 100 o 200 respectivamente, con lo cual obtendremos un nuevo valor, Y, que representa el número de glóbulos rojos existentes por cada mm3 de sangre (sin diluir). Se utilizan para calcular, mediante el uso del microscopio, el número de partículas (leucocitos, hematíes, bacterias…) por unidad de voluimen de un líquido.La cámara está constituida por una placa base de vidrio especial pareciso a un porta, su parte central se encuentra separada de los extremos por unas ranuras. en ella se encuentran las cuadrículas de recuento.La fórmula de contaje es: partículas/mm3= partículas contadas.Clases de cámaras:- Neubauer improved: Es el más utilizado (9 cuadros grandes, cada 1 de 1 mm2.)- Neubauer: La diferencia es el cuadro grande central.- Thoma: Se utiliza solo para el recuento de eritrocitos.- Fuchs-Rosenthal: Se utiliza habitualmente para recuento de células en líquidos orgánicos (LCR, Líquido sinovial…)

Practica 2.

Pesos y Medidas.

Materiales - Peso de cada material.*Vidrio de reloj-18.9 gr.*Matraz Erlenmeyer-100 gr.*Probeta Graduada-97.5 gr.*Cristalizador-49.2 gr.*Vaso Precipitado de 50 ml-26.9 gr.*Vaso Precipitado de 500 ml-116.2 gr.*Pipeta Volumetrica 5 ml-22 gr.*Pipeta Graduada 10 ml-25 gr.*Pipeta Pasteur-2.6 gr.*Portaobjetos-4.6 gr.*Cubreobjetos-1.1 gr.*Tapon-1.6 gr.*Espatula-50.8 gr.Colocamos en la probeta graduada y en el matraz erlenmeyer de 50 ml- 10 ml de agua en cada uno.En el vidrio de reloj colocamos 1 ml de agua y luego pesamos su peso fue 19.6 gr.Cuando le colocamos al vaso Precipitado agua tubo un peso de 3.41 gr.La probeta graduada con agua peso 105.8 gr.Y el vidrio de reloj con azucar peso 21 gr.
Tarea No.1
Investigar molesculas inorganicas y organicas.Moleculas inorganicas.Se denomina compuesto inorgánico a todos aquellos compuestos que están formados por distintos elementos, pero en los que su componente principal no siempre es el carbono, siendo el agua el más abundante. En los compuestos inorgánicos se podría decir que participa casi la totalidad de elementos conocidos. Inorgánico se forma de manera ordinaria por la acción de distintas fuerzas fisicas y químicas; electrólisis, fusión... Podrían considerarse agentes de la creación de estas sustancias a la energía solar, el agua, el oxígeno... Los enlaces que forman los compuestos inorgánicos suelen ser o bien iónicos o bien covalentes.Ejemplos de compuestos inorgánicos:* El agua (H2O) es igual a dos átomos de hidrógeno y un átomo de oxígeno.* El amoniaco (NH3) es igual a un átomo de nitrógeno y tres de hidrógeno.* El anhídrido carbónico, el cual se encuentra en la atmósfera en estado gaseoso y los seres vivos lo eliminan hacia ella a través de la respiración. Su fórmula química es CO2, o sea, un átomo de carbono y dos de oxígeno. El CO2 es ocupado por los vegetales en el proceso de fotosíntesis para fabricar glucosa. Es importante aclarar que el CO2, aunque contiene carbono, no es orgánico porque tampoco contiene hidrógeno.Moleculas organicas.Los compuestos orgánicos (o molecula organica) son sustancias químicas que contienen carbono, formando enlaces covalentes carbono-carbono y/o carbono-hidrógeno. En muchos casos contienen oxígeno, y también nitrógeno, azufre, fósforo, boro, halógenos y otros elementos. Estos compuestos se denominan Moleculas organicas. No son moléculas orgánicas los compuestos que contienen carburos, los carbonatos y los óxidos de carbono.Las moléculas orgánicas pueden ser de dos tipos:* Moléculas orgánicas naturales: Son las sintetizadas por los seres vivos, y se llaman biomoléculas, las cuales son estudiadas por la bioquímica.* Moléculas orgánicas artificiales: Son sustancias que no existen en la naturaleza y han sido fabricadas por el hombre como los plásticos.Se denomina compuesto inorgánico a todos aquellos compuestos que están formados por distintos elementos, pero en los que su componente principal no siempre es el carbono, siendo el agua el más abundante.La molecula de agua que es organica o inorganica?Inorganica porque está formada por distintos elementos, pero en los que su componente principal no siempre es el carbono, siendo el agua este caso.El agua (H2O) es igual a dos átomos de hidrógeno y un átomo de oxígeno.Clasificar las moleculas inorganicas que se ven implicados en el organismo humano, dando a entender su uso y accion dentro del mismo.El agua es el principal elemento en el cuerpo humano, y por esta misma razón, el organismo es considerado como un cuerpo acuoso, ya que más de su 60% está formado por este vital elemento inorgánico.Sales minerales.Dioxido de carbono, el cual exhalams cuando respiramos y es utilizado por las plantas durante la fotosintesis.

Actividad No. 1

Aprender a utilizar materiles para medicion.1. Materiales. Pipetas (5, 10 ml y volumetrica), buretas, probetas (100 ml), matraz erlenmeyer (250 ml), vaso precipitado (250 ml).Lugar de trabajo. Laboratorio clinico.2. Equipo de bioseguridad. Bata, guantes, gorro, cubreboca, lapiz, hojas blancas, borrrador y plumones o bicolores de palos.3. Procedimiento. Peso de materiales (masa). El alumno debe solicitar una balanza granataria para realizar el peso de los materiales que se le facilitan, registrando el peso de cada elemento en forma ordenanda (alfa, numerico), ademas debe registrar la capacidad en volumen de cada elemento.Debe solicitar agua destilada para realizar sus trabajos utilizando el vaso precipitado de 250 ml en una cantidad de 200 ml.4. El alumno debe de utilizar su habilidad y destresa para poder llevar a cabo estaa ctividad de Peso y medida donde puede tener margen de herror en el manejo de las sustancias contra los Pesos y Medidas que deben de utilizar.5. Medicion de liquidos con pipetas. En esta actividad debe solicitar 5 tubos de ensayo, una pipeta de hule, tapon para tubos de ensayo, tela o cinta maskin tape.6. Introducir la punta de la pipeta en el vaso de precipitado que contenga el liquido.7. Succione hasta que el liquido acienda hacia arriba de la marca superior solicitada la cual serra de 1 ml, 2ml, 3 ml, 4ml y 5ml.8. Para poder verificar las gotas correspondientes a un ml debe de utilizar una Pipeta Pasteur con vulvo o globo de plastico para succionar, manejando un ml de agua para ralizar su conteo en gotas, debe solicitar un gotero.9. Solicitar un vidrio de reloj para llevar a cabo el peso de un ml de agua destilada y compararla con un ml de agua corriente de la llave.10.La succion de pipeteo la pude ralizar con la boca si es agua si son liquidos corresivos los debe realizar con pipeta de hule y si es con pipeta como la de sali o pipeta de toma se debe solicitar una manguera especial para estas p[ipetas.11.Controle la descarga del liquidos en el interior de la pipeta con el dedo.12.Para subir si ya esta la cantidad exacta observe la posicion del medisco que se forma.13.Realice 5 determinaciones con pipetas de distinta capacidad para comparar los resultados vacie el contenido de la pipeta en una preobeta que tenga capacidad de recibir el liquido que contiene la pipeta.14.La de la pipeta y enjuague con agua destilada, coloque la pipeta en una gradilla o bien en un vaso de precipitado de 500 ml.15. Antes de usar una pipeta se debe observar cuidadosamente y entender las marcas de calibracion y capacidad.